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流式细胞技术

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点击次数:540 更新时间:2019年06月06日16:48:09 打印此页 关闭

.实验简介及原理介绍

流式细胞技术(flow cytometryFCM)是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术。流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物。

.基本结构

流式细胞仪由三部分构成

1.液流系统,包括流动室和液流驱动系统;

2.光学系统,包括激发光源和光束收集系统;

3.电子系统,包括光电转换器和数据处理系统。流式细胞仪的工作原理是使悬浮在液体中分散的经荧光标记的细胞或微粒逐个通过样品池,同时由荧光探测器捕获荧光信号并转换成分别代表前向散射角、侧向散射角和不同荧光强度的电脉冲信号,经计算机处理形成相应的点图,直方图和加三维结构图像进行分析。

用于FCM的样本是单细胞悬液,可以是血液、悬浮细胞培养液、各种体液、新鲜实体瘤的单细胞悬液以及石蜡包埋组织的单细胞悬液等。

.基本原则

1.使各种液体和悬浮细胞样本新鲜,尽快完成样本制备和检测;

2.针对不同的细胞样本进行适当洗涤、酶消化或EDTA处理,以清除杂质,使粘附的细胞彼此分离而形成单细胞状态;

3.对新鲜实体瘤组织可选用或联用酶消化法,机械打散法和化学分散法来获得足够数量的单细胞悬液;

4.对石蜡包埋组织应先切成若干40-50um厚的蜡片,经二甲苯脱蜡到水后,再用前述方法制备单细胞悬液;

5.单细胞悬液的细胞数不应少于10000个。

.流式细胞技术的应用:

1.其测定细胞内DNA的变异系数最小,一般在2%以下;

2.能准确地进行DNA倍体分析;

3.借助于荧光染料进行细胞内蛋白质和核酸的定量研究;

4.快速进行细胞分选和细胞收集;

5.医学应用:免疫功能研究各种干细胞的检测,癌症病人的多药耐药性,细胞功能及代谢动力学研究,血小板分析(心血管疾病),流式细胞术与分子生物学研究;

6.应用于外周血内皮细胞测定、调节性T细胞等尖端领域。

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